為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí),要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。采用機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室緩沖區(qū)和核心工作區(qū)內(nèi)的送風(fēng)口和排風(fēng)口的布置應(yīng)符合定向氣流的原則,減少房間內(nèi)的渦流和氣流死角,排風(fēng)口應(yīng)設(shè)在室內(nèi)被污染風(fēng)險(xiǎn)最高的區(qū)域,單向布置,不得有障礙,宜采用上送下排方式。
該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。
試劑準(zhǔn)備區(qū)為正壓環(huán)境,壓力為5~10pa,可以保護(hù)試劑準(zhǔn)備不受外界污染。
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。
標(biāo)本制備區(qū)為負(fù)壓環(huán)境,壓力為-10pa,既可以保護(hù)人員不受有害氣溶膠感染,又可以保護(hù)樣本不受外界污染,還可以保護(hù)樣本之間不產(chǎn)生交叉感染。另外,由于在操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染,應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自標(biāo)本制備區(qū)) 的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū)) 制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。
擴(kuò)增區(qū)為負(fù)壓環(huán)境,壓力為-15pa。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,應(yīng)為負(fù)壓環(huán)境,壓力為-20pa,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。